


一
从硬件外观来看,液质的液相部分(常被称为LC-MS专用液相 / UHPLC)同样由流动相瓶、脱气机、高压输液泵、自动进样器、色谱柱温箱组成。但是因为后端连接质谱离子源,它在硬件设计、使用要求上和普通液相有着本质区别。
液质液相与普通HPLC核心对比表

对比项目 | 普通 HPLC | LC-MS专用液相系统 |
常规流速 | 0.8-1.2mL/min | 0.1-0.5mL/min(ESI源优先) |
缓冲盐选择 | 挥发性无要求 (磷酸盐、硼酸盐、 乙酸铵等均可) | 仅允许挥发性盐 (甲酸铵、乙酸铵等) |
脱气优先级 | 简单脱气即可 | 严格脱气 (气泡直接影响质谱信号) |
管路材质 | PEEK/不锈钢均可 | 优先PEEK管路,减少金属吸附 |
色谱柱规格 | 常规4.6×150mm /250mm, 5μm | 短柱、小粒径 (如2.1×50mm, 2.6μm) 减少扩散,提高灵敏度和分离度 |
?? 磷酸盐、硼酸盐、硫酸盐等不挥发性盐严禁直接上液质。盐无法在离子源高温下气化,会析出固体,严重污染锥孔、离子传输管,后期维护成本极高。


二
流动相是影响目标物色谱保留、峰形、离子化响应强度三大要素的核心。很多人遇到质谱响应低,第一反应怀疑仪器脏了,却忽略了流动相体系选错这个最常见的原因。
甲醇、乙腈、甲酸、挥发性缓冲盐怎么选

有机相:甲醇 VS 乙腈
乙腈:黏度低、系统压力低;洗脱能力强;适合反相体系,正离子模式下很多化合物响应优;缺点:部分极性化合物洗脱过快,保留不足。
甲醇:质子给予能力更强,对于部分碱性化合物,有利于[M+H]+生成;黏度更高,柱压相对偏大。
改性剂:正负离子模式选择逻辑
甲酸、乙酸属于挥发性有机酸,最常用来调节流动相pH。
正离子模式(ESI+):添加0.1%甲酸,提供大量H?,促进目标物质子化 [M+H]?,显著提升响应。
负离子模式(ESI?):一般不建议加酸;酸性环境会抑制目标物失去质子生成[M-H]?。负离子常选用氨水、乙酸铵-氨水溶液调节弱碱性环境。
缓冲盐:乙酸铵、甲酸铵
乙酸铵(NH?Ac):乙酸铵是液质为数不多的“安全缓冲盐”,挥发性好,正负离子模式均有应用。pH缓冲区间:4.0-6.0,中性附近,最常用缓冲盐。缺点:低pH环境下缓冲能力弱。
甲酸铵(NH?HCOO):pH缓冲区间:2.8-4.8;优先用于正离子模式。优点:相比甲酸,pH更稳定;缺点:偏中性或弱酸性条件下,缓冲能力不足。
?? 所有挥发性缓冲盐,常规推荐5-10mmol/L,上限尽量不要超过20mmol/L;盐浓度越高,离子抑制、源内析出风险越大。


三
常见色谱柱类型以及适用场景

什么是柱流失?

色谱柱键合相(硅烷基团)在高温、极端pH条件下从硅胶载体脱落,随流动相进入质谱离子源,会持续产生背景离子。普通紫外检测器无法检出柱流失,而质谱属于高灵敏度检测器,微量流失物就会造成离子源污染、背景噪音升高等。
液质色谱柱养护避坑清单

1. 避免使用极端 pH(一般 pH 2~8 安全)。
2. 控制柱温,不要超过 40~50℃(高温加速键合相水解)。
3. 使用高纯水(18.2 MΩ·cm)和优质有机相,减少杂质对柱的损害。
4. 每次实验后用高比例有机相充分冲洗(不含盐)。
5. 复杂基质样品(血清、植物提取液)务必配套固相萃取前处理,减少杂质不可逆吸附在柱头。
(不同品牌色谱柱的pH和温度耐受范围差异较大,以产品说明书为准)



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