自备材料：

1、载玻片、湿盒

2、普通光学显微镜

产品简介

       碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称 ALP 或 AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组

织内，其活性所需最适 pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，其原理是在 pH9.2～9.8 的碱性条件下，细胞内碱性磷酸酶可使 AB-BI 磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色，碱性磷酸酶活性部位呈蓝色，位于胞桨，结果较金属盐沉淀法可靠。

操作步骤：

一、涂片或切片

1、 血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蜡切片无需固定)，水洗。

2、 滴加配制好的 ALP 孵育液，放入湿盒中，避光孵育 15～20min，水洗。

3、 入核固红染色液或甲基绿染色液复染 3～5min。

4、 水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。

二、贴壁培养细胞

1、 取6孔板或其他容器培养的细胞，弃液，PBS清洗干净。

2、 加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10～15min，PBS清洗。

3、 滴加配制好的 ALP 孵育液，放入湿盒中，避光孵育 15～20min，PBS 清洗。

4、 入核固红染色液或甲基绿染色液复染 3～5min。

5、 PBS 清洗、镜检。

染色结果：

ALP 活性部位 蓝色

细胞核 红色(核固红)或绿色(甲基绿)

血液、骨髓涂片结果判断：

一般以积分报告结果，根据 100 个中性粒细胞阳性颗粒进行 0-4 计分。

细胞分值 染色特点

0 无颗粒

1 稍有颗粒

2 中等程度颗粒

3 多数颗粒

4 充满颗粒

注意事项：

1. 血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。

2. 培养细胞染色操作过程中，清洗、染色等步骤都应轻微，以免损伤或丢失细胞。

3. ALP 孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。

4. 复染时，核固红染色液或甲基绿染色液二者取其一。

5. 每次染色时，应有阳性对照片。

相关文献：

《Hedgehog pathway inhibition causes primary follicle atresia and decreases female germline stem cell proliferation capacity or stemness》 作者:Yu Jiang, Dantian Zhu, Wenfeng Liu, Qiushi Qin, Zhi Fang and Zezheng Pan 期刊:Stem Cell Research & Therapy 影响因子:4.627 PMID:31277696