关键字：谷胱甘肽过氧化物酶| GPX活性检测|试剂盒|微量法

简要介绍：
GSH-Px催化H2O2氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能。

产品详细描述

商品货号：	商品品牌：	规格	基本售价：	选择规格
BC1195- 100管/96样	Solarbio	100管/96样	1900.00元

产品内容：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1 支，-20℃保存。
混合试剂配制：临用前，在试剂二中加入试剂一20 mL，充分震荡溶解后加入全部试剂三，混匀。（注意：必须 现配现用，当天使用完）
试剂四：液体×1 瓶，4℃保存。

产品说明： 
GSH-Px 是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异 地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS 的损害，维持细胞的 正常功能；而且具有保护*、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。 GSH-Px 催化H2O2 氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH 还原GSSG，再生GSH，同 时NADPH 氧化生成NADP+；NADPH 在340 nm 有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340 nm 光吸收减少速 率来计算GSH-Px 活性。
自备仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

操作步骤： 
一、粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）:试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取0.1g 组织，加入1mL 试剂一）进行 冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量10 4个：试剂一体积（ml）500~1000:1 的比例,建议500 万细胞加入1mL 试剂一）， 冰浴超声波破碎细胞（率300w，超声3 s，间隔7s，总时间3min）然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置 冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。

二、测定操作:
1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
2. 混合试剂在 25℃或者 37℃（哺乳动物）水浴中预热 30min 以上。
3. 空白管：依次在 1mL 石英比色皿中加入 20μL 蒸馏水、160μL 预热的混合试剂，20μL 试剂四，迅速混匀后于 340nm 处测定第 10 s 和第 190s 的吸光值，分别记为 A 空 1 和 A 空，△A 空白管= A 空 1﹣A 空 2。
4. 测定管：依次在 1mL 石英比色皿中加入 20μL 上清液、160μL 预热的混合试剂，20μL 试剂四，迅速混匀后于 340nm 处测定第 10 s 和第 190s 的吸光值，分别记为 A 测 1 和 A 测 2，△A 测定管= A 测 1﹣A 测 2。
 注意：空白管只需测定一次。 
三、GSH-Px 活性计算：
A.使用微量石英比色皿测定：
(1). 按蛋白浓度计算
GSH-Px 活力单位定义：一定温度中，每 mg 蛋白每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GSH-Px (U/mg prot)=[(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 9]÷（ Cpr×V 样）÷T =536×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
GSH-Px 活力单位定义：一定温度中，每 g 样本每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GSH-Px (U/g)=[(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 9]÷（W×V 样÷V 样总）÷T =536×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
(3). 按细胞数量计算
GSH-Px 活力单位定义：一定温度中，每 10 4个细胞每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GSH-Px (U/10 4 cell)=[(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 9]÷（细胞数量×V 样÷V 样总）÷T =536×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞数量
(4). 按液体体积计算
GSH-Px 活力单位定义：一定温度中，每毫升液体每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GSH-Px (U/ml)=[(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 9]÷V 样÷T =536×(△A 测定管-△A 空白管) ε:NADPH 摩尔消光系数6.22×10 3L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应体系总体积，200μL=2×10 -4 L；10 6：1mol=1×10 6μmol； Cpr：上清液蛋白浓度（mg/mL）；V 样：加入反应体系中上清液体，20μL =0.02 mL； V 样总：加入提取液体积，1mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3min。

B.使用 96 孔板测定： 
(1). 按蛋白浓度计算
GSH-Px 活力单位定义：一定温度中，每 mg 蛋白每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GSH-Px (U/mg prot)=[(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 9]÷（ Cpr×V 样）÷T =1027×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2). 按样本质量计算
GSH-Px 活力单位定义：一定温度中，每 g 样本每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GSH-Px (U/g)=[(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 9]÷（W×V 样÷V 样总）÷T =1027×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
(3). 按细胞数量计算
GSH-Px 活力单位定义：一定温度中，每 10 4个细胞每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GSH-Px (U/10 4 cell)=[(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 9]÷（细胞数量×V 样÷V 样总）÷T =1027×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞数量
(4). 按液体体积计算
GSH-Px 活力单位定义：一定温度中，每毫升液体每分钟催化 1nmol NADPH 氧化为 1 个酶活单位。
GSH-Px (U/ml)=[(△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10 9]÷V 样÷T =1027×(△A 测定管-△A 空白管) ε:NADPH 摩尔消光系数6.22×10 3L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V 反总：反应体系总体积，200μL=2×10 -4 L；10 6：1mol=1×10 6μmol； Cpr：上清液蛋白浓度（mg/mL）；V 样：加入反应体系中上清液体，20μL =0.02 mL； V 样总：加入提取液体积，1mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3min。
 注意事项： 
1. 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力。
2. 混合试剂和底物液须临用前配制，配完后置于冰上，当天使用完。
3. 测定过程操作须迅速。
4. 细胞中GSH-Px 活性测定时，细胞数目须在300 万-500 万之间，细胞中GSH-Px 的提取时可加试剂一后研磨 或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。

相关文献:

《Amelioration of nonalcoholic fatty liver disease by swertiamarin in fructose-fed mice》 作者:Yang Yang,Li Jing,Wei Cong,He Ying,Cao Yixin ,Zhang Yongmin,Sun Wenjia,Qiao Boling,He Jiao 期刊:Phytomedicine 影响因子:4.18 PMID:31005808
《Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development》 作者:Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, Huihui Du, Linping Wang,Dongqin Guo & Tingzhang Hu 期刊:Toxicological & Environmental Chemistry 影响因子:3.547 PMID:28189720
《MicroRNA-98 reduces amyloid β-protein production and improves oxidative stress and mitochondrial dysfunction through the Notch signaling pathway via HEY2 in Alzheimer's disease mice》 作者:Fang?Zhou Chen Ying Zhao Hui?Zhao Chen 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影响因子:2.928 PMID:30365070