索莱宝新推出了Tunel检测试剂盒，主要分为绿色荧光和DAB显色两种方法，可有效满足多数人的实验需求！

01反应原理

细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。因此，Tunel成为了检测DNA片段化（细胞凋亡）的最常用方法。

Tunel检测试剂盒（绿色荧光）可以通过一步反应将荧光素标记的dutp结合到3'-末端，使荧光素结合到DNA上，从而达到凋亡细胞的原位标记。

Tunel检测试剂盒（DAB显色法）可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的催化作用下，将3'-OH末端与与生物素（Biotin）-dUTP结合，然后通过亲和素和生物素反应，将HRP酶标记到DNA的3'-末端，最后通过DAB显色，进行凋亡细胞标记，在光学显微镜下可以直接观察。

02产品优势

①安全性佳：工作液内不含二甲申酸钠等危化成分，配方简单安全且操作简单；

②特异性好：不易出现假阳性等情况，荧光阳性信号强；

③适用性广：适用于凋亡细胞或石蜡组织切片检测以及流式检测等实验。

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Solarbio阳性信号更加明显

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常见FAQS:

Q1: Tunel染色阳性信号弱？

可能原因

1. 组织或细胞通透不够导致后续酶和荧光素无法进入细胞内标记到DNA上；

2. 细胞或组织凋亡程度不够，常规37℃反应1h达不到预期；

3. 蛋白酶K修复后洗脱不完全，导致后续荧光标记效果不佳；

4. 试剂失效或荧光素猝灭。

解决方案

1. 合理把控通透时间：对于细胞，适当延长通透时间增加通透性；对于不同组织，选择合适的蛋白酶K修复时间，一般3-4μm石蜡切片室温修复10min即可；

2. 调整优化细胞凋亡诱导方案，在常规反应时间上增加至2-3h；

3. 增加修复后洗涤次数和时间，确保蛋白酶K洗脱完全；

4. 选择保质期新鲜的试剂盒用于实验。

Q2: Tunel染色全阳性？

可能原因

1. 曝光时间过长导致大面积阳性信号；

2. 样本处理方法不对，阳性对照DNase处理过度；

3. 某些组织凋亡程度高，常规37℃反应1h反应过度。

解决方案

1. 选择合适的曝光时间；

2. 可以调整DNase的稀释比例，增大稀释比从而减少阳性率；

3. 选择一个阳性对照切片，37℃反应1h观察阳性率。

Q3: Tunel染色结果背景和非特异性荧光强？

可能原因

1. 染色操作过程中出现干片现象导致背景荧光强；

2. 漂洗次数不足，未能洗脱背景荧光着色；

3. 血细胞、肌纤维等存在自发荧光，导致非特异着色；

4. 曝光时间长；

5. 工作液混匀不完全，探针未能均匀溶解，导致非特异性荧光杂点。

解决方案

1. 染色过程中，暂停操作时，建议滴加1×PBS保持样本湿润，同时用免疫组化笔圈下组织，减少液体流失；

2. 增加工作液孵育后漂洗次数和时间；

3. 制备切片前对组织进行充分灌注或者采用自发荧光猝灭剂处理组织切片；

4. 提高分辨率，调节黑平衡或降低曝光时间。