干细胞是一种未充分分化,具有自我复制能力的多潜能细胞,在一定诱导条件下,可以分化为成骨细胞、成软骨细胞和成肌细胞等,还可以分化为巨噬细胞、脂肪细胞、内皮细胞和成纤维细胞等骨髓基质细胞,具有发育为骨、软骨、脂肪、肌肉、真皮及骨髓基质等中胚层组织的潜能。
简言之,干细胞体外定向诱导分化就是选择适当的诱导剂和诱导方法,通过诱导剂与细胞表面受体结合或使细胞发生轻度可逆性损伤等,使被诱导细胞按预定的细胞类型方向分化,然后将这些定向分化的细胞进行分离和培养传代,从而得到人们所需要的细胞类型。一般的,成骨分化和成脂分化是间充质干细胞MSC必要的功能性鉴定指标。成骨分化经茜素红染色法鉴定,成脂分化经油红O染色法鉴定。
Solarbio新增了成骨/成脂诱导迷你化合物Kit,每种Kit均由对应种类经典的可用于诱导的基础试剂、用于鉴定与分析的高品质染料以及相关试剂组成,具有良好的生物活性。客户也可以根据自己的实验需求删减或添加其他的化合物,也可灵活定制专属Kit,所有组分均已经过NMR、HPLC或MS检测,以确保化合物纯度和准确性。
产品说明
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成骨诱导小分子化合物Kit |
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成脂诱导小分子化合物Kit |
基本操作(仅供参考)
1. 接种骨髓间充质干细胞
取对数生长期的细胞,按照2×104cells/cm2的细胞密度接种至包被后的培养器皿中,于37℃,5% CO2培养环境下培养至相应的融合度(成骨诱导:60~70%;成脂诱导:90~100%),弃掉上清,加入成骨诱导分化培养基(含有地塞米松、维生素C、茜素红等)或成脂诱导分化培养基(含有地塞米松、胰岛素、吲哚美辛和IBMX)。
2. 细胞分化诱导
成骨诱导:每2~3天更换诱导培养基,于37℃,5%CO2培养环境下培养,并注意观察细胞形态变化(一般约14~28天左右)。根据细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情况,决定终止细胞诱导的时间,进行后续固定和染色鉴定(茜素红染色)。
成脂诱导:于37℃,5%CO2培养环境下培养约2~3天,更换为成脂诱导分化培养基维持液(只含有胰岛素)培养1天。按照以上换液频率继续诱导(一般是3个循环,约14天左右),并注意观察细胞形态变化。根据细胞诱导形成的脂滴数量和大小,决定终止细胞诱导的时间,并进行后续固定和染色鉴定(油红O染色)。
3. 细胞固定
吸去培养基,使用适量1×PBS清洗一次,弃去后取适量4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面,室温固定30~60 min,弃去固定液再使用1×PBS清洗两次。
4. 染色鉴定
加入适量的染色工作液,染色合适的时间(茜素红:3~5min;油红O:静置染色30min),吸去染液,用1×PBS清洗两次,并加入适量1×PBS避免细胞干燥。
5. 诱导评估与分析
显微镜下观察染色效果,并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时,成骨诱导后的钙质结节会与茜素红染料结合后呈现红色或橘红色。成脂诱导后的脂滴会与油红O染料结合后呈现红色或橘红色。
对于成骨诱导还可以进行半定量分析,上述显微观察结束后,弃上清,加入氯化十六烷基吡啶溶液,室温下孵育15~60min溶解矿化结节(茜素红),然后在562 nm处检测上清的OD值。
更多产品
套装货号 |
套装名称 |
套装说明 |
IK-CEA-1 |
细胞激活Kit-1 |
本套装内含1000×PMA(81μM)、Ionomycin(1.34mM)、Brefeldin A(2mM)的DMSO溶液和Monensin(10.6mM)的EtOH溶液各一支,每支溶液100μL。 |
IK-HIF-1 |
缺氧小分子 化合物Kit-1 |
本套装精选了数种靶向HIF/HIF Prolyl-Hydroxylase的化合物,可用于细胞氧感应相关的研究,例如:缺氧、氧化应激等。 |
IK-ADC-1 |
抗糖尿病小分子 化合物Kit-1 |
本套装精选了数种经典的、具有良好生物活性的糖尿病相关化合物,可用于探索糖尿病的相关研究。 |
IK-CA-2 |
肿瘤小分子 化合物Kit-2 |
本套装精选了数种抗肿瘤化合物和具有促肿瘤活性的化合物,可用于黑色素瘤、骨髓瘤、淋巴瘤、非小细胞肺癌和乳腺癌等相关研究。 |
IK-TNF-1 |
肿瘤坏死因子TNF小分子化合物Kit-1 |
本套装精选了数种靶向肿瘤坏死因子TNF的化合物,可用于抗肿瘤的相关研究。 |
IK-PD-1 |
帕金森小分子 化合物Kit-1 |
本套装精选了数种靶向多巴胺受体、腺苷受体、肾上腺素受体及单胺氧化酶等,可用于帕金森的相关研究。 |
IK-AD-1 |
阿兹海默症小分子 化合物Kit-1 |
本套装精选了数种靶向Amyloid-β等受体的化合物,可用于阿兹海默症的相关研究。 |
IK-AB-1 |
常用抗生素小分子化合物Kit-1 |
本套装精选了数种实验室常备的抗生素,可用于鉴定药物靶标的相关研究。 |
G1450 |
茜素红S染色液(0.2%,pH8.3) |
茜素红S染色液由缓冲液配制,适合组织和细胞的钙盐染色,pH8.3更适用于培养细胞的钙盐染色,钙盐处有橘黄色或橘红色沉积,颜色强度取决于钙盐含量。 |
G1262 |
油红O染色试剂盒(细胞专用) |
本试剂盒适用于细胞诱导脂滴染色,可显示最小的脂滴,可优先为脂类从溶剂中吸附染料。标本不采用含有乙醇的固定液,如需要固定可采用10%福尔马林。脂肪阳性染色结果呈橘黄至红色,但具体颜色因脂质浓度而定。 |
更多小分子化合物Kit即将上新......
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