数据读取和处理

以夹心法为例

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推荐使用酶标仪进行双波长检测，测定450 nm和630 nm波长下的OD值，并用450 nm的OD测定值减去630 nm的OD测定值。

2

ELISA的样本和标准品通常要设置1~2个复孔进行检测，分别求出标准品、样本吸光度的平均OD值。

3

每个标准品和样品的OD值应减去空白孔的OD值。

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以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，推荐使用Origin或ELISA Calc软件绘制标准曲线，样品中待检物质的含量可通过对应OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

结果计算

若使用Origin软件建立标准曲线，详细步骤如下：

第一步: 打开软件，分别在A(X)列和B(Y)列输入标准品浓度和标准品OD值。

第二步：选择拟合曲线类型

选中上步输入的数值，按如下操作依次点击选项。

第三步：在左侧选择<Find X/Y>，右侧勾选< Find X from Y>。完成上述操作后，点击Fit按键，拟合曲线和相关信息将自动生成。

第四步：查看标准曲线信息（如参数值，R-Square等）

第五步：根据标准曲线计算样本浓度

选择第四个工作表<Fit NLF Find X from Y1>，在左侧A1（Y）输入样本的OD值，对应的浓度将在右列自动生成。

注意事项

1. 如果样本进行了稀释，计算样本浓度时请乘以相应的稀释倍数。

2. 若样本OD值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。

若使用ELISA Calc软件建立标准曲线，详细步骤如下：

第一步：将标准曲线数据在Excel表格中整理成两列，第一列是浓度，第二列是平均OD值。

第二步：打开ELISA Calc软件，复制Excel中数值部分，点软件的<粘贴>；选择<回归/拟合模型>，一般优先选择Logistic曲线拟合（四参数）、直线回归或二次曲线回归；点击<回归/拟合>。

第三步：点<由Y计算X值>，将样本OD值在Excel中整理成一列，右键选复制，然后点软件的<粘贴>，点软件的<复制>，即可将计算的结果到Excel中粘贴。

注意事项

1. 如果样本进行了稀释，计算样本浓度时请乘以相应的稀释倍数。

2. 若样本OD值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。